AZF Microdeletions REAL-TIME PCR Genotyping Kit

REAL TIME PCR TRONG NGHIÊN CỨU GEN NGƯỜI - HUMAN GENETICS

AZF Microdeletions REAL-TIME PCR Genotyping Kit

Di truyền trong sinh sản

Theo WHO, khoảng 15% các cặp vợ chồng tìm đến trợ giúp y tế cho vô sinh mỗi năm.

Infertility - Vô sinh là một người đàn ông hoặc phụ nữ trong độ tuổi sinh đẻ không có khả năng sinh sản con cái. Một cặp vợ chồng được coi là vô sinh nếu người phụ nữ không thể có thai trong vòng một năm quan hệ tình dục không được bảo vệ thường xuyên (ít nhất một lần mỗi tuần). Vô sinh được phân thành:

• Vô sinh sơ cấp: các cặp vợ chồng không bao giờ có thai;
• Vô sinh thứ phát: cặp vợ chồng mang thai nhưng bị sẩy thai, thai chết lưu, vv;
• Vô sinh tuyệt đối;
• Vô sinh tương đối.

Trung bình, khoảng 5% các cặp vô sinh tuyệt đối, khi điều trị không đạt được kết quả [125]. Các cuộc hôn nhân vô sinh thường được đặc trưng bởi các rối loạn di truyền có thể gây ra bởi các rối loạn nội tiết, dị tật bộ phận sinh dục và rối loạn sinh tinh. Chẩn đoán nhanh và chính xác là điều quan trọng trong việc lựa chọn điều trị hiệu quả cho vô sinh.

Điều quan trọng cần nhớ là khắc phục vô sinh giữa các rối loạn di truyền có thể dẫn đến sự ra đời của một đứa trẻ bị bệnh. Chẩn đoán đúng sẽ giúp thụ thai và sinh con khỏe mạnh. Bác sĩ phụ khoa và chuyên gia trị liệu phải có kiến thức đầy đủ về nguyên nhân di truyền của vô sinh để họ có thể đưa ra các khuyến nghị thích hợp cho các cặp vợ chồng muốn có con [148].

AZF Microdeletions Real-Time PCR Genotyping Kit

Vô sinh nam là một người đàn ông không có khả năng làm một người phụ nữ mang thai.

Rối loạn di truyền có mặt trong 30-50% trường hợp oligozoospermia, azoospermia và các rối loạn nghiêm trọng khác được phát hiện thông qua phân tích tinh dịch.

NST Y trong vùng AZF (yếu tố azoospermia) là yếu tố di truyền phổ biến nhất của vô sinh nam.

Ở nam giới với azoospermia hoặc oligozoospermia, microdeletions có thể có mặt trong ba loci của nhiễm sắc thể Y - AZFa, AZFb và AZFc (Hình 22). Những loại bỏ này là cực kỳ hiếm đối với normospermia và cho nồng độ tinh trùng > 5 triệu / ml.

Nhiễm sắc thể Y không được phát hiện thông qua phân tích tế bào học, do đó làm cho tìm kiếm di truyền phân tử của chúng hợp lý. Viện Hàn lâm Sinh học Châu Âu (EAA) khuyến cáo nên thử nghiệm tất cả những người đàn ông có azoospermia và severe oligozoospermia (<5 triệu tinh trùng trên mỗi mililít tinh dịch) cho sự có mặt của AZF Đứt đoạn[72].

Tiểu vùng AZFa chứa ba gen có tên UTY, USP9Y và DBY, có sự đứt đoạn dẫn đến azoospermia với hội chứng chỉ tế bào Sertoli loại 1 (không có tế bào mầm trong các ống bán nguyệt), điển hình cho việc đứt đoạn AZFa hoàn toàn [47, 121 ].

Cần lưu ý rằng AZFa không chứa các chuỗi lặp đi lặp lại và việc đứt đoạn của nó xảy ra với tần suất thấp (khoảng 5% của tất cả các vi dữ liệu nhiễm sắc thể Y). Đánh dấu STS sY84, sY86 và sY615 là đủ để xác định việc đứt đoạn AZFa. Việc sử dụng ít nhất hai dấu - sY84 và sY86 - có ý nghĩa chẩn đoán [47, 121, 122].

Các thủ thuật để phân lập tinh trùng bằng cách phẫu thuật không có hiệu quả ở nam giới khi thực hiện việc đứt đoạn tinh trùng này.

Hình 22. Biểu diễn sơ đồ vùng AZF

Tiểu vùng AZFb chứa các trình tự được thể hiện bằng cả một bản sao và dưới dạng các chuỗi palindromic trực tiếp và đảo ngược lặp lại cao. Đứt đoạn AZFb xảy ra trong khoảng 16% của tất cả các microdeletions nhiễm sắc thể Y.

Gen RBMY đa bản sao (30 đến 40 bản sao), có sự đứt đoạn được phát hiện ở nam giới có azoospermia hoặc severe oligozoospermia, được ánh xạ trong tiểu vùng này. Các điểm đánh dấu STS trong tiểu vùng này là sY127 và sY134. Phù hợp với các hướng dẫn của Viện Hàn lâm Sinh học Châu Âu (EAA) và Mạng lưới Chất lượng Di truyền Phân tử Châu Âu (EMQN), mất các dấu hiệu này đi kèm với các rối loạn sinh tinh nặng với nguy cơ cao của loại hội chứng chỉ tế bào Sertoli I [21].

Đứt đoạn một phần của phần gần của vùng AZF được đặc trưng bởi các triệu chứng lâm sàng nghiêm trọng hơn so với đứt đoạn xa. Hoàn thành việc đứt đoạn AZFb, dẫn đến sự chậm trễ trong sự trưởng thành tinh trùng trong quá trình sinh tinh có ý nghĩa lâm sàng chính. Trong trường hợp này, dự báo TESA là không thuận lợi.

Đứt đoạn AZFc là phổ biến nhất (trên 60% tổng số vi khuẩn nhiễm sắc thể Y). AZFc bao gồm các khối chuỗi lặp lại cao, được tổ chức thành cấu trúc palindromic, với tổng chiều dài 3,5x106 bps. [99].

Một trong những gen quan trọng trong tiểu vùng này là gen DAZ. Việc xóa b2 / b4 dẫn đến mất tất cả các bản sao của nó. Các dấu hiệu sY254, sY255, sY1291, sY1206, sY1197 và sY1125 được sử dụng để nhận dạng nó.

Hình ảnh mô học của tinh hoàn trong việc đứt đoạn b2/b4 có thể khác nhau vì sự sinh tinh trùng bị block  ít thường xuyên hơn so với việc đứt đoạn AZFa và AZFb. Hội chứng Sertoli chỉ có hội chứng loại II (số lượng tế bào sinh tinh tối thiểu trong ống dẫn tinh) hiếm khi được phát hiện. Do đó, tinh trùng có thể được phát hiện cả trong tinh hoàn và trong tinh dịch [84, 121].

Thêm một kiểu đứt đoạn Y - gr / gr (sY1291) - được mô tả trong vị trí AZFc. Trong trường hợp này, một nửa tiểu vùng AZFc biến mất, điều này làm thay đổi số lượng bản sao của gen nằm trong khu vực này. Nguy cơ mắc bệnh giảm tinh trùng (oligozoospermia) cao gấp 7 lần ở những người mang đứt đoạn gr / gr. Khối u tế bào mầm tinh hoàn có thể phát triển [33, 98, 106].

Những đứt đoạn micro của một số tiểu vùng của nhiễm sắc thể Y được tìm thấy trong 15% trường hợp. Chúng hầu như luôn dẫn đến hội chứng vô tinh trùng (azoospermia) và Sertoli. Hơn nữa, rối loạn sinh tinh trong trường hợp đứt đoạn ngoại biên AZFb và AZFc có thể ít nghiêm trọng hơn [47].

CHÚ Ý!

Trong số các dấu hiệu được xác định, có một số nhóm liên quan đến độ bám dính bền vững:

• sY84, sY86,

• sY127, sY134,

• sY254 và sY255

Việc đứt đoạn chỉ một điểm trong nhóm gần như không xảy ra. Mỗi trường hợp, khi đứt đoạn chỉ một trong hai điểm được thiết lập, được coi chủ yếu là hình giả tạo PCR và yêu cầu một nghiên cứu khác (Hình 23) [8].

Hình 23. Sơ đồ khối để tự kiểm soát trong phòng thí nghiệm, với chỉ dẫn các bước phân tích (Krausz C., 2014

Trong việc xác định các nguyên nhân di truyền gây vô sinh, đặc biệt là đứt đoạn một phần AZF, vô sinh có thể được khắc phục bằng cách tiêm tinh trùng vào tế bào chất (ICSI). Cần lưu ý rằng trong trường hợp thụ thai, việc đứt đoạn nhiễm sắc thể Y chắc chắn sẽ được truyền cho tất cả con trai của người đàn ông, và kích thước của các microdeletion của họ có thể được mở rộng hơn để đứt đoạn hoàn toàn. Về vấn đề này, cần phải quan sát các bé trai được sinh ra thông qua ICSI để đánh giá khả năng sinh sản của chúng.

Nếu microdeletions AZF được phát hiện ở người cha thông qua công nghệ hỗ trợ sinh sản, chẩn đoán di truyền tiền ghép và chuyển phôi nữ được khuyến nghị [128].

Đột biến vi mất đoạn vùng AZF là nguyên nhân chủ yếu thứ 2 gây vô sinh ở nam giới, sau Hội chứng Klinefelter.
Việc xét nghiệm sàng lọc vi đột biến ở vùng AZF góp phần xác định nguyên nhân của các trường hợp vô sinh, có giá trị định hướng cho các bác sĩ lâm sàng điều trị, tìm cách khắc phục thích hợp cho bệnh nhân, làm cơ sở cho tư vấn di truyền phòng ngừa, hạn chế việc truyền gen bệnh cho các thế hệ sau. Giảm chi phí việc điều trị nội khoa không hiệu quả, gây tốn kém cho người bệnh.

Chỉ định phân tích di truyền:

• Kiểm tra cặp vợ chồng vô sinh trong các phương pháp chẩn đoán phức tạp;
• Lựa chọn các phương pháp khắc phục vô sinh đầy đủ;
• Đánh giá xác suất giải phóng tinh trùng trong TSЕ, МЕSA, ЕSA hoặc TЕSA;
• Đánh giá nguy cơ rối loạn sinh sản ở con trai.

DNA-Technology đã phát triển bộ kit (xem Bảng 37-39) để phát hiện đứt đoạn AZF liên quan đến vô sinh nam. Bảng phân tích bao gồm 13 điểm không đa hình cho phép phát hiện đứt đoạn trong tất cả các vị trí AZF.

Bảng 37. AZF Microdeletions Real-Time PCR Genotyping Kit

* Note:

RU/IVD – kits for In Vitro Diagnostic, which are registered in Russia only

CE/IVD – kits for In Vitro Diagnostic, which are registered in EU

RUO – kits for Research Use Only

Bảng 38. Thành phần strip, mã màu và các kênh phát hiện

Bảng 39. Bộ hoàn chỉnh AZF Microdeletions Real-Time PCR Genotyping Kit

Công nghệ:

Real-time polymerase chain reaction – Real Time PCR.

Thiết bị cần thiết để phân tích:

Các thiết bị DT được sản xuất bởi DNA-Technology: DTlite, DT- prime.

Máy real time PCR “DTprime” và “Dtlite” – HSX: DNA – Technology

Nhà phân phối độc quyền tại Việt Nam: Công ty TNHH Thiết Bị BDE

Bộ kits tách chiết DNA:

• PREP-RAPID GENETICS;
• PREP-GS GENETICS

Số lượng DNA tối thiểu để phân tích:  1.0 ng cho ống khuếch đại.

Tài liệu tham khảo: DNA-Technology

Quý khách hàng vui lòng liên hệ với BDE – đơn vị phân phối độc quyền tại Việt Nam để được tư vấn miễn phí:

Công ty TNHH Thiết Bị B.D.E

​Số 44, TT 3 - Khu Đô Thị Văn Phú  - Hà Đông - Hà Nội

Tel : 02466 807 528          Fax 0433 513 114

Email : info@bde.vn

Hotline 097 664 11 99

Website: www.bde.vn